Monkeypox Virus Real Time PCR Kit

1. SampolKoleksyon:Ang specimen kinahanglan nga kolektahon sa sterile nga mga tubo sumala

nga adunay standard nga teknikal nga mga detalye.

2. Pagpangandam sa Reagent (Lugar sa Pagpangandam sa Reagent)

Kuhaa ang mga sangkap sa kit, balansehon kini sa temperatura sa kwarto para magamit sa standby.

3. Pagproseso sa Ispesimen (Lugar sa Pagproseso sa Ispesimen)

3.1 Pagkuha sa nucleic acid

Kini girekomendar sa pagkuha sa 200μL liquid samples, Positive Control ug Negative Control alang sa nucleic acid extraction, sumala sa katugbang nga mga kinahanglanon ug mga pamaagi sa viral DNA extraction kits.

3.2 Lyophilized powder dissolving ug template nga pagdugang

Pag-andam sa Monkeypox Virus Lyophilized premix sumala sa gidaghanon sa mga sample.Ang usa ka sample nagkinahanglan og usa ka PCR tube nga adunay Lyophilized premix powder.Ang negatibo nga pagkontrol ug positibo nga pagkontrol kinahanglan nga isipon nga duha ka mga sample.

(1) Idugang ang 15μL Dissolving Solution sa matag PCR tube nga adunay Lyophilized premix, unya idugang ang 5μL nga gikuha nga mga sample / Negative Control / Positive Control sa matag PCR tube matag usa.

(2) Tabuni pag-ayo ang mga tubo sa PCR, i-flick ang mga tubo sa PCR pinaagi sa kamot hangtod ang lyophilized powder hingpit nga matunaw ug masagol, kolektaha ang likido sa ilawom sa PCR tubes pinaagi sa dali nga low-speed centrifugation.

(3) Kon gamiton ang komon nga Real-time nga PCR nga instrumento para sa detection, dayon ibalhin ang PCR tubes ngadto sa amplification area;kon gamiton ang BTK-8 para sa detection, nan kinahanglan nga buhaton ang mosunod nga mga operasyon: pagbalhin sa 10 μL nga likido gikan sa PCR tube ngadto sa reaction chip nga atabay sa BTK-8.Ang usa ka PCR tube katumbas sa usa ka atabay sa chip.Atol sa operasyon sa pipetting, siguroha nga ang pipette 90 degrees bertikal.Ang mga tip sa aerosol barrier pipette kinahanglan ibutang sa tunga sa atabay nga adunay kasarangan nga kusog ug hunongon ang pagduso sa pipette kung kini moabut sa una nga gear (aron malikayan ang mga bula).Human mapuno ang mga atabay, kuhaa ang usa ka membrane sa reaksyon sa chip aron matabonan ang tanan nga mga atabay ug ang chip dayon ibalhin sa lugar nga makit-an sa amplification.

4. PCR Amplification (Detection Area)

4.1 Ibutang ang PCR tubes/reaction chip ngadto sa reaction tank ug ibutang ang mga ngalan sa matag reaksyon og maayo sa katugbang nga han-ay.

4.2 Settings sa detection fluorescence: (1) Monkeypox virus (FAM);(2) Internal Control (CY5).

4.3 Pagdalagan ang mosunod nga cycling protocol

Protocol sa ABI7500, Bio-Rad CFX96, SLAN-96S, QuantStudio:

 Protocol sa BTK-8:

5. Pagtuki sa mga resulta (palihug tan-awa ang Manwal sa Gumagamit sa Instrumento)

Human sa reaksyon, ang mga resulta awtomatikong maluwas.I-klik ang "Analyze" aron analisahon, ug ang instrumento awtomatik nga maghubad sa Ct values ​​sa matag sample sa resulta column.Ang negatibo ug positibo nga mga resulta sa pagkontrol kinahanglan nga mahiuyon sa mosunod nga "6. Quality Control ".

6. Pagkontrol sa Kalidad

6.1 Negative Control: Walay Ct o Ct> 40 sa FAM channel, Ct≤40 sa CY5 channel nga adunay normal nga amplification curve.

6.2 Positibo nga Pagkontrol: Ct≤35 sa FAM channel nga adunay normal nga amplification curve, Ct≤40 sa CY5 channel nga adunay normal nga amplification curve.

6.3 Ang resulta balido kung ang tanan nga mga pamatasan sa itaas matuman.Kay kon dili, ang resulta dili balido.

Paghubad sa Resulta

Posible ang mosunod nga mga resulta:

NOTA: Kung mahitabo ang dili balido nga resulta, ang sample kinahanglan nga kolektahon ug sulayan pag-usab.